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전이 유전자의 삽입을 배제한 돼지 유도 만능 줄기세포의 수립 / 최유정

18 인체실험 조회 수 154 추천 수 0 2017.01.13 10:06:15
nibp *.223.3.98
발행년 : 2012 
구분 : 학위논문 
학술지명 :  
관련링크 : http://www.riss.kr/link?id=T12740349 

전이 유전자의 삽입을 배제한 돼지 유도 만능 줄기세포의 수립

: Isolation of porcine induced pluripotent stem cells without transgene integration

                                       

  • 저자

    최유정                                       

  • 형태사항

    29p ; 26cm

  • 일반주기

    지도교수 :심호섭

  • 학위논문사항

    Thesis(M.A.)-- 단국대학교 : 나노바이오의과학과 재생의과학 2012. 2

  • 발행국

    대한민국

  • 언어

    영어

  • 출판년

    2012

초록 (Abstract)

  • 역분화를 통한 유도만능줄기세포 2006년 쥐를 통해 연구가 시작된 이래 다양한 포유 동물을 통해 보고되어 오고 있다. 그 중 돼지 세포를 이용한 연구는 2009년에 레트로바이러스 그리고 렌티...
  • 역분화를 통한 유도만능줄기세포 2006년 쥐를 통해 연구가 시작된 이래 다양한 포유 동물을 통해 보고되어 오고 있다. 그 중 돼지 세포를 이용한 연구는 2009년에 레트로바이러스 그리고 렌티바이러스 체계를 통해 시작되었다. 통상 바이러스 또는 플라스미드를 이용하여 역분화 유지에 필요한 네 가지 전사인자를 삽입시켰다. 그러나 바이러스와 플라스미드 두 가지 방법 모두 전이유전자가 숙주 세포에 있는 염색체에 삽입되어 c-Myc과 같은 전사인자를 통해 암을 유발할 수 있어 의학적으로 사용하기에는 어려움이 있다. 따라서 본 연구에서는 돼지 체세포에 2A peptide 로 연결된 pCAG2LMKOSimO 플라스미드 벡터를 사용하여 염색체 내 유전자의 삽입 없는 유도만능줄기세포의 수립을 시도하였다. 유도된 돼지 만능줄기세포는 mOrange 발현을 통해 숙주세포에 플라스미드 벡터가 들어갔는지 유무를 확인할 수 있고, 또한 세포 내 전이유전자의 발현을 확인 할 수 있었다. 그리고 면역세포화학법 과 역전사효소 유전자 증폭법을 통해 돼지 유도만능줄기세포가 줄기세포의 특성을 지니는지 확인하였다. 또한 배상체와 낭포 형성을 통해 분화능을 확인하였다. 유도된 세포는 돼지 배아줄기세포와 모양과 유전적으로 매우 유사하였다. 플라스미드 벡터에 있는 전이유전자 양 끝에 loxP 부분이 있어 Cre recombinase를 이용하여 전이유전자를 제거하였다. 이와 같이 외래유전자가 제거된 돼지 유도만능 줄기세포는 세포 치료용으로 의학적으로 적용할 수 있을 것으로 기대된다.

목차 (Table of Contents)

  • I. Introduction . 1
  • II. Materials and Methods . 3
  • 1. Collection and culture of fetal fibroblasts 3
  • 2. Transgene construct 3
  • 3. Transfection of fetal fibroblasts 4
  • 4. Immunocytochemistry 5
  • 5. RT-PCR 5
  • 6. Karyotyping 6
  • 7. In vitro differentiation 7
  • 8. removal of transgene 7
  • III. Results . 9
  • 1. Isolation of porcine iPS cells 9
  • 2. Expression of pluripotency markers 9
  • 3. RT-PCR for piPSCs 10
  • 4. Karyotyping 10
  • 5. Formation of embryoid body and cysts 10
  • 6. Removal of transgenes 10
  • IV. Discussion . 21
  • References . 23
  • Abstract in Korean 28
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