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글 수 369
| 발행년 : | 2014 |
|---|---|
| 구분 : | 학위논문 |
| 학술지명 : | |
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Tert 유전자 조작 마우스 모델의 생산
- 기타서명
Generation of a cell line and a mouse strain with epitope-tagged Tert gene by genome engineering system
- 저자
이지현
- 형태사항
47 p. : 삽화(일부천연색) ; 26 cm
- 일반주기
지도교수: 이한웅
- 학위논문사항
학위논문(석사)-- 연세대학교 대학원 : 생화학과 2014. 8
- 발행국
서울
- 언어
한국어
- 출판년
2014
초록 (Abstract)
- 유전자 적중 (gene targeting)에 의해 생산된 유전자 변형 마우스 모델(GEM, Genetically-Engineered Mouse)은 유전자의 기능을 개체 수준에서 연구하는데 필수적이나 복잡한 과정과 긴 시간이 소요되는 배아줄기세포(ES cell)의 이용으로 인해 생산하기가 매우 어렵다. 근래에 들어 engineered nuclease 기술이 급속도로 발전하여 보다 효율적인 genome editing에 대한 기대가 높아지고 있다. 세포 내에서 engineered nuclease에 의해 유도된 DNA double-strand break (DSB)는 오류가 빈번한 Non-homologous end joining (NHEJ)나 오류가 일어나지 않는 Homologous recombination (HR)을 통해서 repair되는데, 이 때 insertion/deletion (indel)에 의한 유전자의 knock-out (KO) 또는 donor DNA의 HR에 의한 knock-in (KI) mutation을 유도할 수 있다. 최근에는 zinc-finger nuclease (ZFN)의 이용을 통해 마우스 수정란에서 바로 genome editing에 성공함으로써, 향 후 GEM 생산에 있어 많은 노력이 수반되는 ES cell의 사용을 배제할 수 있는 가능성이 제기되었다. 이에 본 연구자는 유전자 가위로써 개발된 TALEN (Transcription activator-like effector nuclease)과 CRISPR/Cas9 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats; RNA-guided endonuclease, RGEN)을 적용하여 아직 적절한 항체가 개발되지 않은 telomerase 단백질(mTERT)에 대해 triple hemagglutinin (HA) epitope가 tagging된 telomerase 단백질(3xHA-TERT)을 발현하는 GEM을 제작하여 in vivo 기능 연구에 이용하고자 하였다. TALEN과 RGEN을 생산하여 in vitro 또는 cell line을 통해 그 활성들을 검증하였으며, 그 중에서 높은 활성과 정확도를 나타낸 것으로 확인된 RGEN을 마우스 수정란에 직접 전달하여 3xHA-TERT KI 마우스 모델을 제작하였다. 본인은 본 연구를 통해서 RGEN을 이용한 KI 마우스 제작이 가능함을 처음으로 확인하였으며, 앞으로 이와 유사한 전략을 이용한 GEM 제작이 다양한 GEM 모델의 개발을 촉진할 것이며, 이는 곧 많은 유전자들의 생체 내 역할 규명과 질환 모델 연구에 이바지할 것이다.
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